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          當前位置:首頁技術文章超濾離心管使用方法

          超濾離心管使用方法

          更新時間:2025-08-12點擊次數:711

          超濾離心管操作指南:3大誤區毀樣本|附分子截留/離心參數對照表

          超濾回收率<50%?本文詳解Millipore/Amicon超濾管選型技巧、離心程序、防堵膜策略,提供蛋白濃縮/緩沖液置換/脫鹽全方案!附轉速-分子量計算公式+堵膜急救方案。

          一、超濾管選型黃金法則(立即避坑)

          需求

          膜材質

          截留分子量

          代表產品

          蛋白濃縮

          再生纖維素

          10kDa

          Amicon® Ultra-4

          病毒純化

          PES

          100kDa

          Millipore UFC9100

          核酸回收

          低吸附PVDF

          30kDa

          Vivaspin® 20

          內毒素去除

          超低吸附

          3kDa

          Amicon® Ultra-15

          >??選錯致命傷:截留分子量>目標物樣本穿透丟失!

          二、操作流程(4步提升回收率至>90%

          Step1預處理(防膜失效關鍵!)

          1.離心管冰上預冷

          2.注入1ml預冷PBS

          3.1500g×5min(活化膜孔,去除甘油/乙醇)

          Step2樣本加載

          參數

          標準值

          避坑要點

          最大裝載量

          80%管容積

          防溢出污染

          樣本粘度

          50cP(過高需稀釋)

          粘度檢測方法:移液器吸打阻力

          保留液體積

          ≥50μl(防干膜)

          定時觀察液面

          Step3離心程序(轉速/時間公式)

          ?離心力計算公式:

          RCF(g)=0.00001118×r×(RPM)2

          r=離心半徑cm

          分子量-離心參數表:

          截留分子量

          推薦離心力

          時長

          3kDa

          4000g

          20-30min

          10kDa

          3500g

          15-25min

          50kDa

          3000g

          10-15min

          >??防過熱技巧:4℃離心+10min暫停降溫

          Step4樣本回收

          -正置法:直接吸取濃縮液(回收率80-90%

          -倒置法(高價值樣本):

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          三、3大高頻問題急救方案

          問題1:膜堵塞(流速驟降)

          -處理步驟:

          1.0.1MNaOH反向沖洗10min

          2.超純水沖洗3

          3.500g×5min低速離心疏通

           問題2:回收率低

          -根因排查:

          現象

          原因

          對策

          濾液渾濁

          膜破裂

          更換新管(勿超速)

          管壁掛液明顯

          疏水吸附

          預處理加 0.01% Tween-20

           

          問題3:濃縮倍數不足

          -科學濃縮比計算:

          ```

          濃縮倍數=初始體積/終體積

          (推薦≤10倍,防蛋白沉淀)

          ```

          -高倍濃縮技巧:分次添加樣本(維持液面高度)

          四、不同應用場景參數優化


          實驗目標

          關鍵參數調整

          回收率

          蛋白濃縮

          4℃ + 3500g × 15min

          92%

          緩沖液置換

          預裝新緩沖液 ×3

          99%

          脫鹽

          超純水稀釋 ×5

          98%

          外泌體純化

          100kDa + 3000g ×30min

          80%




          五、產品推薦

          密理博millipore超濾離心管——天津益元利康生物科技有限公司,歡迎咨詢。

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