polyscience24765轉染步驟

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以6孔板細胞培養轉染為例:

使用細胞培養液3ml，DNA質粒3ug，PEI轉染試劑9ug?？梢愿鶕煌毎匦?，增加DNA和PEI使用量。
一、細胞培養

1. 轉染前24 h左右對細胞進行傳代，接種密度約為1 - 3 × 105 cells/well。細胞接種密度，大約在60%左右。

2. 過夜培養。
3. 吸出培養液，使用新鮮培養液清洗3-4次。然后，加入2.7 ml新鮮配置的wanquan培養基。因為細胞過夜生長的分泌物有可能影響轉染效率，所有建議進行細胞清洗操作。更換新鮮培養液，有助于轉染后的細胞表達和生長，防止細胞營養的不足。
    也可以不吸出培養液，不更換新鮮培養液，直接進行細胞轉染。
4. 當細胞匯合度達到60% - 80%時，轉染可以取得較高的轉染效率。
二、PEI/DNA復合物配置
1. 在1.5 ml無菌離心管中加入150 μl opti-MEM無血清培養基，并加入3 ug DNA質粒，用移液器輕輕混勻。

2. 在1.5 ml無菌離心管中加入150 μl opti-MEM無血清培養基，并加入9 ug PEI轉染試劑儲存液，用移液器輕輕混勻。

3. 將PEI-opti-MEM滴加至DNA-opti-MEM中，用移液器輕輕混勻，室溫靜置15 - 30 min后可用于轉染。注意：形成的PEI/DNA復合物溶液盡量在30 min內使用。
4. PEI/DNA復合物的形成，一定是分別在無血清培養基中稀釋后，再進行混勻。血清的存在會干擾復合物的形成。

三、細胞轉染
1. 將PEI/DNA復合物混合液滴加至6孔板培養基中，輕輕晃動吹打培養液使PEI/DNA復合物均勻分散。
2. 過夜培養24-72小時。

四、初始轉染條件

五、PEI轉染效率

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