polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®產(chǎn)品說明書

更新時(shí)間：2023-06-28

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polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®產(chǎn)品說明書

該polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®產(chǎn)品說明書以DNA轉(zhuǎn)染為例來進(jìn)行說明：

第0天：細(xì)胞接種

→根據(jù)下表在V mL細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中接種細(xì)胞（每個(gè)孔、盤子或燒瓶的數(shù)量）

培養(yǎng)皿	細(xì)胞數(shù)量	V=轉(zhuǎn)染過程中培養(yǎng)基的體積
96孔板	7500 - 10 000	0.1 mL
24孔板	50 000 - 80 000	0.5 mL
12孔板	80 000 - 150 000	1 mL
6孔板/35mm	150 000 - 250 000	2 mL
100 mm/燒瓶 75 cm²	1 x 10⁶ - 2 x 10⁶	10 mL

*備注：對(duì)于特定的細(xì)胞類型或懸浮細(xì)胞，請(qǐng)參考完整的方案。

第1天：轉(zhuǎn)染

→在血清存在的情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染

→僅使用jetPRIME®緩沖液

→以60-80%融合率轉(zhuǎn)染細(xì)胞

培養(yǎng)皿	W=jetPRIME®緩沖液的體積	X=添加的DNA量	Y=jetPRIME®試劑的體積
96孔板	10 µL	0.1 µg	0.2 µL
24孔板	50 µL	0.5 µg	1 µL
12孔板	75 µL	0.8 µg	1.6 µL
6孔板/35mm	200 µL	2 µg	4 µL
100 mm/燒瓶 75 cm²	500 µL	10 µg	20 µL

第2-3天：測(cè)量基因表達(dá)

√ Protocol優(yōu)化：

測(cè)試不同的DNA量：X、0.5X和1.5X；

測(cè)試不同的DNA/jetPRIME®比例，1:2至1:3；

有關(guān)細(xì)胞特異性Protocol，請(qǐng)聯(lián)系益元利康客服獲取相關(guān)信息。

培養(yǎng)皿	W=jetPRIME®緩沖液的體積	X=添加的DNA量	Y=jetPRIME®試劑的體積
96孔板	10 µL	0.05-0.20 µg	0.10-0.60 µL
24孔板	50 µL	0.25-0.75 µg	0.50-2.25 µL
12孔板	75 µL	0.4-1.2 µg	0.8-3.6 µL
6孔板/35mm	200 µL	1-3 µg	2-9 µL
100 mm/燒瓶 75 cm²	500 µL	5-15 µg	10-45 µL

備注：對(duì)于HEK-293和HeLa細(xì)胞，可以將DNA量減少到0.5X，并使用1:2 DNA/jetPRIME®比例。

√ 提高敏感細(xì)胞細(xì)胞活力的提示：

轉(zhuǎn)染后4小時(shí)更換培養(yǎng)基；

將DNA量減少到0.5倍，同時(shí)保持之前使用的DNA/jetPRIME®比例；

在較早的時(shí)間點(diǎn)（例如轉(zhuǎn)染后24小時(shí)而不是48小時(shí)）分析轉(zhuǎn)染；

檢查靶基因是否影響細(xì)胞活力。

√ 良好的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)例：

適當(dāng)儲(chǔ)存jetPRIME®（5±3°C）；

確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前已傳代兩次以上且少于20次；

丟棄過度分化的細(xì)胞；

定期檢查支原體污染情況；

使用報(bào)告基因來建立和優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件；

血清質(zhì)量可能嚴(yán)重影響轉(zhuǎn)染效率，購買新一批血清時(shí)或胰蛋白酶檢查細(xì)胞活力以及轉(zhuǎn)染效率。

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