WB實驗基本原理

　　WB 是進行蛋白質(zhì)分析流行和成熟的技術(shù)之一，全稱為蛋白質(zhì)免疫印跡，那么你知道WB實驗的基本原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！
 

　　WB的由來
 

　　1975年，英國人Edwin Mellor Southern發(fā)明了基因組DNA特定序列定位的方法：
 

　　將待測定DNA分子從瓊脂糖凝膠中轉(zhuǎn)移到一定的固相支持物硝酸纖維素膜(NC膜)上，即印跡(blotting)，然后膜上的核酸與同位素標(biāo)記的探針在一定的溫度和離子強度下雜交，檢測特定DNA片段，并將這種方法命名為Southern印跡法；后來Alwine又用類似方法檢測RNA，正好與DNA相對應(yīng)，故被稱為Northern印跡雜交；1981年Burette成功將對單向電泳分離后的蛋白質(zhì)分子轉(zhuǎn)印到膜上并進行免疫學(xué)分析(如抗體抗原特異性結(jié)合)，這種印跡分析稱為Western印跡法；而Eastern blotting是Western blotting的變形，只是檢測對象變成了雙向電泳后的蛋白質(zhì)分子(所謂的雙向電泳是等電聚焦-聚丙烯酰胺凝膠電泳(IEF-PAGE)分離蛋白質(zhì))。
 

　　WB實驗是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)將混合蛋白質(zhì)樣品分離后，利用特殊虹吸或電場裝置印跡至與相對應(yīng)的第一抗體特異性結(jié)合，之后再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體相結(jié)合，最終通過底物顯色或放射自顯影來檢測特異性目的基因表達的蛋白成分。Western Blotting先使用PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)電泳分離出待檢測的蛋白質(zhì)，再用電場裝置印跡至固相介質(zhì)(如PVDF膜)上，固相介質(zhì)以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及生物學(xué)活性不變。再以膜上的蛋白質(zhì)片段作為抗原，與一抗(“探針”)特異性結(jié)合起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記標(biāo)記的二抗結(jié)合，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。
 

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