外泌體提取試劑盒原理

外泌體提取試劑盒的原理多種多樣，但其核心都是基于外泌體的物理特性或生化特性，將其從復(fù)雜的生物樣品（如細(xì)胞上清、血清、血漿）中分離出來。

目前主流的外泌體提取試劑盒主要基于以下幾大原理：

外泌體的形成和攜帶物質(zhì)

一、外泌體提取試劑盒原理一：超速離心法 (Ultracentrifugation, UC) - “金標(biāo)準(zhǔn)"

雖然傳統(tǒng)上不算是“試劑盒"，但它是所有方法的比對基準(zhǔn)。現(xiàn)在也有配套的密度梯度試劑。

原理：利用外泌體的大小、密度和沉降系數(shù)與樣品中其他成分（如蛋白質(zhì)、細(xì)胞碎片、大囊泡）的差異，在超高速離心力（通常≥100,000 × g）下，外泌體會(huì)被沉淀到管底。

特點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：被認(rèn)為是提取外泌體的“黃金標(biāo)準(zhǔn)"；無需特殊化學(xué)試劑，可獲取較純凈的外泌體。

缺點(diǎn)：設(shè)備極其昂貴；流程耗時(shí)漫長（數(shù)小時(shí)至數(shù)天）；需要大量起始樣本；高速離心力可能損傷外泌體結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致聚集。

二、外泌體提取試劑盒原理二：聚合物的沉淀法 (Polymer-based Precipitation)

這是目前zui常用的試劑盒原理。例如 Qiagen exoEasy, System Biosciences (SBI) ExoQuick, 和 Wako 的普通提取試劑。

原理：

向樣品中加入親水性聚合物（如PEG）。

這些聚合物會(huì)與溶液中的水分子結(jié)合，“劫持"水化層，破壞外泌體的溶解性。

同時(shí)，它們能形成一個(gè)“網(wǎng)"來捕獲外泌體。

在低速離心力下，外泌體-聚合物復(fù)合物就會(huì)從溶液中共同沉淀下來。

特點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：操作簡單快速；無需昂貴設(shè)備；起始樣本量要求低；回收效率高。

缺點(diǎn)：純度較低，會(huì)共沉淀蛋白質(zhì)聚合物、脂蛋白等雜質(zhì)；沉淀可能難以重懸；聚合物可能干擾下游分析。

三、外泌體提取試劑盒原理三：尺寸排阻色譜法 (Size-exclusion Chromatography, SEC)

能獲得高純度、高完整性外泌體的方法。例如 qEV系列/Izon Science 產(chǎn)品。

原理：

樣品被加載到一個(gè)充滿多孔聚合物微球的色譜柱上

不同大小的分子在通過柱子時(shí)，路徑長短不同。

大分子（如外泌體）無法進(jìn)入微球的小孔，會(huì)沿著微球之間的縫隙快速流動(dòng)，最先被洗脫出來。

小分子（如蛋白質(zhì)、小RNA）會(huì)進(jìn)入微球的大量孔隙中，路徑更長，較晚被洗脫出來。

通過分步收集，即可獲得純度很高的外泌體組分。

特點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：能獲得完整性好、生物活性高的外泌體；純度遠(yuǎn)高于沉淀法；避免了聚集效應(yīng)。

缺點(diǎn)：樣本可能被稀釋；上樣量有限；對于粘性樣本（如血漿）易堵塞柱子。

四、外泌體提取試劑盒原理四：免疫親和捕獲法 (Immunoaffinity Capture)

純度最高、特異性zui強(qiáng)的方法。例如 Wako的 MagCapture™、CD9/CD63/CD81抗體磁珠試劑盒。

原理：

利用外泌體表面特異性標(biāo)志物（如 CD9, CD63, CD81, EpCAM 等）。

將針對這些標(biāo)志物的抗體固定在固相支持物上（如磁珠、平板、色譜柱）。

當(dāng)樣品流過時(shí)，表面帶有相應(yīng)標(biāo)志物的外泌體會(huì)被抗體特異性捕獲，而雜質(zhì)則被洗去。

通過改變pH值或使用競爭性肽段進(jìn)行洗脫，即可得到高純度的特定外泌體亞群。

特點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：純度ji高；可用于分離特定細(xì)胞來源的外泌體亞群。

缺點(diǎn)：成本昂貴；洗脫條件可能較劇烈，損傷外泌體活性；只能捕獲表達(dá)特定標(biāo)志物的外泌體，會(huì)丟失其他亞群。

五、外泌體提取試劑盒原理五：微流控技術(shù) (Microfluidics)

新興的前沿技術(shù)，主要用于集成化、自動(dòng)化的快速檢測。

原理：在芯片上構(gòu)建微米級(jí)的通道，通過聲學(xué)、力學(xué)或免疫親和原理，在流體中實(shí)時(shí)捕獲和分離外泌體。

特點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：所需樣本量極少；速度快；有望實(shí)現(xiàn)高度集成化和自動(dòng)化。

缺點(diǎn)：技術(shù)尚未wanquan成熟和普及；通量較低；設(shè)備成本高。

總結(jié)與選擇指南

如何選擇？

追求速度和簡便 → 沉淀法試劑盒

追求純度和生物活性 → 尺寸排阻色譜試劑盒

追求超高純度或特定亞型 → 免疫親和捕獲試劑盒

有超離設(shè)備且不趕時(shí)間 → 超速離心法

產(chǎn)品推薦：EZB外泌體提取試劑盒