HGC-27細(xì)胞培養(yǎng)指南 | 實(shí)驗(yàn)步驟與防污染技巧（新手必讀）

更新時(shí)間：2025-03-11

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HGC-27細(xì)胞是一種來(lái)源于人胃癌患者轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)的低分化胃癌細(xì)胞系，具有較強(qiáng)的侵襲性和增殖能力，常用于研究胃癌的分子機(jī)制、藥物篩選以及侵襲與轉(zhuǎn)移特性分析。它在體外呈上皮樣貼壁生長(zhǎng)，呈多角形或短梭形，以單層形式生長(zhǎng)。能夠在免疫缺陷小鼠中形成移植瘤，是胃癌相關(guān)研究的重要模型。

一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備（關(guān)鍵物料清單）

? 細(xì)胞來(lái)源：建議從ATCC/中科院細(xì)胞庫(kù)獲?。ㄅ?hào)可溯源）
? 培養(yǎng)基：RPMI-1640 + 10% FBS + 1%雙抗（Gibco品牌優(yōu)選）
? 儀器：37℃恒溫CO?培養(yǎng)箱（CO?濃度5%）、生物安全柜（潔凈度100級(jí)）

二、詳細(xì)培養(yǎng)步驟

1. 復(fù)蘇操作

快速解凍37℃水浴≤2分鐘離心去DMSO1000rpm×5min重懸接種初始密度2×10? cells/cm2

?? 防凍傷要點(diǎn)：解凍后立即轉(zhuǎn)移至預(yù)溫培養(yǎng)基

2. 傳代方法

消化控制：0.25%胰酶（含EDTA）作用2-3分鐘（鏡下觀察細(xì)胞變圓）
終止技巧：加入含血清培養(yǎng)基（體積≥3倍消化液）
分瓶比例：1:3至1:4（24-48小時(shí)可達(dá)80%融合度）

3. 凍存方案

凍存液配方：90% FBS + 10% DMSO（現(xiàn)用現(xiàn)配）
程序降溫：4℃ 30min → -20℃ 2h → 液氮長(zhǎng)期保存

三、培養(yǎng)問(wèn)題排查（附解決方案）

常見問(wèn)題	原因分析	應(yīng)對(duì)措施
增殖緩慢	血清批次差異/FBS濃度不足	更換優(yōu)質(zhì)血清（≥南美產(chǎn)地）
細(xì)胞漂浮	消化過(guò)度/支原體污染	縮短消化時(shí)間/PCR檢測(cè)
黑點(diǎn)污染	真菌孢子污染	棄用全批+環(huán)境紫外滅菌

?? 注意事項(xiàng)（提升實(shí)驗(yàn)成功率）

狀態(tài)監(jiān)控：每日觀察細(xì)胞形態(tài)（貼壁率＜50%需排查）
傳代周期：不超過(guò)30代（建議定期STR鑒定）
污染預(yù)防：操作前紫外滅菌30min，試劑瓶酒精噴淋

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