間充質干細胞的分離——脂肪MSC分離培養

問充質干細胞(MSC)是一種源自中胚層的多能干細胞，能夠從骨、脂肪、臍帶、胎盤、臍血、皮膚等多樣的組織里分離獲取，具有強大的增殖能力和多向分化潛能，不僅能分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞等，還能分化為肌細胞、肝細胞、胰島細胞等多種細胞類型。間充質干細胞在組織工程、基因治療和免拉治療等諾多方面展現出巨大的應用前景，為醫學領域帶來了新的希望和突破方向，對于多種疾病的治療和研究都有著重要意義。

一、小鼠脂肪組織獲取

1.3天齡到4周齡(推薦小周齡)小型，頸椎脫白法處死后于75%酒精浸10min。

2.將小鼠橫向，背面朝上放置，背部中心嬰向剪開皮膚1cm;沿著開口處撕去腹股溝皮膚，暴露對稱的腹股溝部位白色胎肪組織，鈍性剝離。

二、胎肪MSC分離培養(酶消化法)

1. 消化:取脂肪組織25mL，4°℃ PBS沖洗3次，去除筋膜及紅細胞，眼科剪剪碎，4°CPBS沖洗3次，每5mL脂防分裝入50mL離心管，加入2倍體積的0.075961型膠原，37℃恒溫搖床以80r/min的搖速震蕩消化1h，待充分消化后，加入與酶等體積的含10%FBS的DMEM-F12完quan培養基終止消化。

2. 離心與計數:300g，離心10min，去除上層未消化的脂肪組織、油脂及中層潔液，5mL紅細胞裂解液重懸沉淀，室溫靜置5min，200g，離心5min，去除上清液，完quan培養基重懸沉淀，200日網過濾后，取樣計數，根據計數結果調整細胞濃度，最終以(1-5)x101/cm2接種于培養皿中，置于37℃℃，5%C0,培養箱中培養。

3. 接種培養:48h后換液，之后每3d換一次液，待細胞生長至80%-90%融合時，用體積分數0.25%膚蛋白酶消化后按1:2傳代培養。

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