密理博PVDF膜一文Get

前言：WB實驗中的轉膜，顧名思義，是將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體上，同時維持其相對位置和分辨率的過程。需要根據雜方案和被轉移蛋白的特性.以及蛋白分子量大小等條件去選擇合適材質、孔徑的雜交膜。

一、膜材質的選擇

Western Blot實驗中zui常用的轉印膜有兩種：PVDF膜（聚偏二氟乙烯膜）和NC膜（硝酸纖維素膜）。

1. NC膜

NC膜背景很低，可結合蛋白質和核酸進行各種印跡應用?？蛇m用于蛋白質印跡法、RNA印跡法、DNA印跡法和斑點雜交技術。但缺點是對于分子量較小的蛋白質會在洗滌時丟失，且NC膜韌性較差，操作時容易碎，對操作的技巧要求較高；

2. PVDF膜

PVDF膜在機械強度和化學相容性上都具有更good的性能，且靈敏度高、分辨率和蛋白親和力較其他的膜要高，非常適合分子量較小的蛋白質檢測，通常需要甲醇/乙醇預先活化?，F在有新出的免甲醇潤濕的PVDF膜，可以免去甲醇對實驗操作人員的傷害。

3.根據膜材質的特性選擇轉印膜，涉及以下幾方面的考慮：

蛋白結合能力

是否需要用醇預濕

開展多次剝離（stripping）和再次檢測（reprobing）實驗的能力

蛋白觀察

長期印跡保存

信噪比

可以看出常規PVDF膜相對NC膜優點更多，實用性廣。

PVDF膜可提供更好的蛋白截留率、物理強度和廣泛的化學兼容性。其中更高的機械強度和出色的耐化學性使PVDF膜成為免疫檢測中各種染色應用和多次檢測的理想選擇。使用PVDF膜的另一個優點是，從單塊凝膠上轉移的平行重復泳道可用于后續各種應用，如考馬斯亮藍染色，接著切割條帶進行N端測序，蛋白水解/肽段分離/內部測序，以及免疫檢測。

二、選擇膜孔徑

選到合適材質的膜之后，還需要根據檢測蛋白的大小，選擇合適的膜孔徑。Western Blot轉印膜通常有兩種孔徑大小：0.2μm和0.45μm。

推薦產品：

1. Immobilon®-P 0.45umzui chang用的WB轉印膜，適用于一般的免疫印

跡應用。（貨號：IPVH00010）

0.45μm：更加常用，適合大于20kD的蛋白，背景較低

2.Immobilon®-PSQ 0.2um小分子蛋白/肽WB轉印膜（貨號：ISEQ00010）

適用于蛋白測序和低分子量蛋白的免疫印跡。它有著更高的蛋白結合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。0.2μm ：特別適合小于20kD的蛋白；推薦用于低豐度蛋白檢測。結合能力是由孔的內部表面積來決定的（文獻參考：Mansfield，1994）。0.2μm轉印膜的內部表面積大約是0.45μm轉印膜的三倍，使其吸附能力更高

三、選擇合適的轉印膜形式

• 卷膜

• 預切膜

預切好的膜與所有預制膠以及大部分市售的凝膠電泳系統兼容。

對于用量較小的情況，優先推薦選擇預裁切的包裝產品，使用比較便捷也可以避免浪費。對于用量較大的情況，推薦使用整卷產品。預裁切產品無需再進行裁切，使用非常便捷；并且由于機械化裁切的效率很高，可以避免手工裁切導致的膜裁切時的浪費。

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