感受態細胞制備原理與舉例

一、感受態細胞

即受體細胞通過理化方法處理，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態的細胞。

二、感受態細胞制備原理

將快速生長的大腸桿菌置于經低溫0℃預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹（滲透作用），同時，Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞。

大腸桿菌DH5α感受態細胞

三、大腸桿菌DH5α感受態制備實驗步驟

實驗步驟一

從-80℃冰箱中取出保種的DH5α菌株，用滅菌的槍頭吸取少量保菌液加入至合適的LB液體培養基中，在LB固體培養基進行涂板處理，置于37℃培養箱中過夜培養。

實驗步驟二

次日，從LB固體培養基上挑取濕潤，圓滑的大腸桿菌單菌落，接種于無抗生素的5ml LB液體培養基中，37℃下振蕩培養過夜，至對數生長后期。將該菌懸液以1:100～1:50的比例接種于100ml LB液體培養基中，37℃振蕩培養2-3h至OD600＝0.3-0.5左右。（注：此步必要時可在顯微鏡下鏡檢菌細胞是否形態一致，有無雜菌污染。）

實驗步驟三

在無菌條件下將菌液轉移到冰上預冷的離心管中，冰上放置10-30min，使培養物冷卻至0℃，然后4℃，4000rpm/min離心10min；

實驗步驟四

棄掉上清，倒置1 min，以便將培養液流盡；

實驗步驟五

用冰預冷的0.1 mol/L的CaCl2溶液10 ml輕輕懸浮細胞，充分混勻，冰上放置30 min后，4℃下4000rpm/min離心10min；

實驗步驟六

棄掉上清，并倒置1 min，以便最后的培養液流盡；

實驗步驟七

加入4 ml預冷含15%甘油（已滅菌處理）的0.1 mol/L的CaCl2溶液，輕輕懸浮細胞，冰上放置幾分鐘，即成感受態細胞懸液；

實驗步驟八

感受態細胞100 μL分裝，標記貼標簽，貯存于-80 ℃保存備用。

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