Transwell遷移實驗步驟

一、細胞遷移

     細胞遷移 (cell migration) 也稱為細胞爬行、細胞移動或細胞運動，是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產(chǎn)生的移動。細胞遷移為細胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細胞體尾部收縮在時空上的交替過程。細胞遷移是正常細胞的基本功能之一，是機體正常生長發(fā)育的生理過程，也是活細胞普遍存在的一種運動形式。胚胎發(fā)育、血管生成、傷口愈合、免疫反應、炎癥反應、動脈粥樣硬化、癌癥轉移等過程中都涉及細胞遷移。細胞遷移實驗是研究細胞在體外條件下移動能力的一種實驗方法，廣泛應用于細胞生物學、腫瘤學和免疫學等領域。細胞遷移實驗基于細胞對環(huán)境變化的反應能力，這些變化可以是物理的（如空間間隙）或化學的（如梯度差）。實驗目的是模擬并觀察細胞如何在這些條件變化下移動，從而了解細胞遷移的機制和影響因素。

二、Transwell細胞遷移實驗

1、簡介

Transwell實驗，也稱為Transwell遷移或侵襲測定實驗，是一種用于細胞生物學和分子生物學的實驗室技術，用于研究細胞通過多孔膜的運動。它通常用于研究細胞對各種刺激（如生長因子、趨化因子或細胞外基質成分）的遷移、趨化性和侵襲。Transwell實驗對于評估細胞通過多孔屏障遷移或侵襲的能力特別有用，多孔屏障模擬細胞必須穿過體內組織的生理條件。Transwell實驗涉及Transwell小室（插入物）和孔板，它們是一種由分隔兩個隔室的滲透膜組成的裝置。 通常，頂部室充滿細胞，而底部室包含化學引誘劑或誘導細胞遷移的物質。多孔膜允許細胞通過膜上的小孔從頂部室遷移到底部室。

2、步驟

1）在24孔板中放置Transwell插入物。向每個Transwell上室添加適量無血清培養(yǎng)基（通常為100-200 µL），向下室添加含有化學誘導劑的培養(yǎng)基（通常為600-800 µL）。

2）用無菌PBS清洗培養(yǎng)的細胞。使用胰酶消化細胞，并加入含有無血清培養(yǎng)基的管中中止消化。計數(shù)細胞，并調整細胞懸液至適當濃度（例如1×105 cells/mL）。

3）向Transwell上室中添加適量的細胞懸液（通常為100-200 µL）。小心處理以避免氣泡形成。

4）將Transwell板放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24-48小時，以允許細胞遷移。

5）孵育結束后，取出Transwell插入物。

6）用無菌PBS輕輕清洗上室，去除未遷移的細胞。

7）用固定液（如甲醇或4%多聚甲醛）固定下室遷移的細胞，固定時間通常為10-15分鐘。

8）用PBS清洗并染色（如0.1%結晶紫染色或DAPI染色）。

9）用棉簽擦去上室膜上的未遷移細胞。使用顯微鏡觀察下室膜上的遷移細胞，并拍攝圖像。計數(shù)多個視野中的遷移細胞數(shù)，計算平均值。

10）匯總遷移細胞數(shù)量，進行統(tǒng)計分析，繪制細胞遷移圖。

結果圖展示

注意事項請點擊跳轉：Transwell實驗注意事項

三、實驗中會用到的PBS推薦

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