Toxin金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)的應(yīng)用

金黃色葡萄球菌腸毒素B（Staphylococcal enterotoxin B, SEB）由于具有超抗原性，且在SEs系列毒素中毒性最qiang、最為耐熱，對(duì)腸胃道蛋白酶最有抵抗性，在食品加工過(guò)程中極難去除，故對(duì)人類(lèi)健康具有嚴(yán)重的威脅。

《金黃色葡萄球菌腸毒素B單克隆抗體的研制及雙功能免疫層析試紙條產(chǎn)品開(kāi)發(fā)》一文中，就首先以SEB為免疫原，通過(guò)免疫Balb/C小鼠，測(cè)定小鼠血清效價(jià)、細(xì) 胞融合、篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞、亞克隆以及抗體配對(duì)等一系列操作，最終獲得兩株能穩(wěn)定分泌抗SEB單克隆抗體的細(xì)胞株（分別命名為15H11和5D6），且兩株抗體能夠與SEB形成穩(wěn)定的“三明治"夾心結(jié)構(gòu)；兩株抗SEB單克隆抗體均為IgG1 亞型，親和常數(shù)分別為2.08 × 109 M以及1.81 × 109 M；且與其它四種常見(jiàn)腸毒素 SEA，SEC，SED以及SEE均無(wú)交叉反應(yīng)。 其次，以油氨修飾的金納米粒子（AuNPs@OA）、紅色聚集誘導(dǎo)發(fā)射熒光染料（AIEgens）為比色、熒光功能材料，1-十八烯馬來(lái)酸酐聚合物（PMAO）為填充劑，通過(guò)微乳液法合成了具有Janus結(jié)構(gòu)的比色-熒光雙功能納米微球（JAIE@Au NBs）。由于AuNPs@OA和AIEgens在聚合物PMAO中溶解度存在極大差異，在氯仿蒸發(fā)過(guò)程中AuNPs@OA和AIEgens發(fā)生明顯相分離，導(dǎo)致AIEgens自動(dòng)聚集成核，PMAO形成殼層，而AuNPs@OA分布在PMAO層一側(cè)，因而形成了具有Janus結(jié)構(gòu)的比色-熒光雙功能J-AIE@Au NBs。由于AuNPs與AIEgens存在物理間隔，且AuNPs在AIEgens一側(cè)，因此有效地消除了兩者之間的能量轉(zhuǎn)移，且降低了熒光內(nèi)濾效應(yīng)，從而極大地保留了AIEgens的熒光信號(hào)。隨后將單克隆抗體15H11標(biāo)記J-AIE@Au NBs獲得免疫探針，在NC膜上噴涂抗體5D6制備獲得比色定性以及熒光定量檢測(cè)SEB的免疫層析試紙條J-AIE@Au-ICA。在最佳條件下，該試紙條檢測(cè)全脂乳中SEB的定量線(xiàn)性范圍為0.39 ng/mL ~ 400 ng/mL，最di檢測(cè)限（Limit of detection, LOD）為0.09 ng/mL，靈敏度較傳統(tǒng)ELISA法提高了近70 倍；同時(shí)，采用比色法裸眼定性檢測(cè)SEB的最di檢測(cè)限為1.56 ng/mL。該試紙條 檢測(cè)全脂乳中SEB的批內(nèi)、批間加標(biāo)回收率為86.0 2%至115 %，變異系數(shù)介于 4.97 %至12.86 %之間，且與其它4種常見(jiàn)腸毒素?zé)o交叉反應(yīng)。此外，該試紙條檢 測(cè)生牛乳以及脫脂乳中SEB的LOD分別為0.19 ng/mL和0.19 ng/mL。隨后，將試紙 條分別用于檢測(cè)人工污染SEB的全脂乳、生牛乳和脫脂乳樣品，結(jié)果顯示回收率 介于91.04 %至118.82 %之間，變異系數(shù)介于3.91 %至12.86 %之間。以上結(jié)果表明，本研究建立的比色、熒光雙功能試紙條能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)多種牛奶中的SEB快速且準(zhǔn)確的定量分析。

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