你知道什么是雙熒光素酶實驗嗎？

在基因表達(dá)調(diào)控的研究中，報告基因廣泛應(yīng)用，如熒光蛋白、真核抗性和熒光素酶等。在一些臨床醫(yī)學(xué)或基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)文章中，雙熒光素酶結(jié)合驗證實驗部分是多數(shù)機(jī)制研究bi備的實驗部分，例如：在通路研究中，尤其涉及到miRNA與功能基因的相互作用時，雙螢光素酶報告基因檢測實驗是bi備的實驗要點(diǎn)。那么你知道到底什么是雙熒光素酶實驗嗎？讓我們一起來看看吧！

螢光素酶（Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物螢光的酶的總稱，其中應(yīng)用較為廣泛的是螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）和海腎螢光素酶（Renilla luciferase）。

螢火蟲螢光素酶可以催化螢光素氧化成oxyluciferin，在螢光素氧化的過程中，會發(fā)出生物螢光，呈現(xiàn)黃綠色，海腎螢光素酶可以催化腔腸素氧化成coelenteramide，在腔腸素氧化的過程中，會發(fā)出生物螢光，呈現(xiàn)藍(lán)光，通過酶標(biāo)儀即可測定所發(fā)出的生物螢光。

雙螢光素酶報告基因通常以螢火蟲螢光素酶為報告基因，以海腎螢光素酶為內(nèi)參基因，如此所構(gòu)成的報告系統(tǒng)有檢測靈敏度高、動態(tài)范圍廣、內(nèi)參平衡等優(yōu)勢，因此在實驗中得到廣泛應(yīng)用。

常見應(yīng)用方向：

1. 驗證miRNA同mRNA靶向互作。將靶mRNA的3’UTR序列插入報告基因載體，再共轉(zhuǎn)入該miRNA，檢測螢光素酶活性。

2. 驗證miRNA同circRNA靶向互作。將circRNA序列插入報告基因載體中F-Luc的3’UTR區(qū)域，檢測螢光素酶活性。

3. 驗證miRNA同IncRNA靶向互作。將IncRNA序列插入報告基因載體中F-Luc的3’UTR區(qū)域，檢測螢光素酶活性。

4. 啟動子活性分析。

將啟動子區(qū)域序列進(jìn)行分段截短，再分別構(gòu)建入報告基因載體，檢測其啟動子活性。

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