保存蛋白質的原則及方法有哪些？

在完成蛋白質純化后，如果保存不當，容易發(fā)生失活和變性的情況，那么你知道保存蛋白質的原則及方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！

一、原則

1. 低溫

保存蛋白質時，確保在低溫條件下至關重要。低溫意味著較低的能量水平，有助于減緩蛋白質分子內部的熱運動，減少鍵的斷裂可能性。此外，在低溫下，微生物繁殖減緩，潛在的蛋白酶活性降低，從而有助于維持蛋白質的活性。

2. 無菌

在進行蛋白質實驗操作時，務必佩戴手套。盡管實驗室戴手套通常是為了保護實驗者自身，但在生化實驗中，蛋白質是我們需要保護的主體。我們皮膚上存在一些蛋白酶，可能會降解蛋白樣品。此外，皮膚上的其他化學物質也可能污染蛋白樣品。為了防止細菌生長，最好將蛋白質保存在經過滅菌處理的容器中。

3. 濃度

為了提高蛋白質的穩(wěn)定性，建議以較高濃度保存重組蛋白質，最好保持在1mg/ml以上。高濃度有助于防止蛋白質分子附著在塑料或玻璃管壁上。不容忽視的是，疏水性蛋白質容易附著在管壁上。

4. 分裝

蛋白質需要冷凍保存，但在實驗中常在室溫或更高溫度使用。反復凍融過程中產生的冰晶會損害蛋白質的結構和構象。為減少凍融次數，建議將純化后的蛋白質進行分裝保存，每次使用前融化所需量，以確保蛋白質樣品經歷單次凍融。

二、保存

1. 長期保存

對于凍干狀態(tài)的重組蛋白，由于處于wan全脫水的狀態(tài)，在不受潮的情況下可以在冰箱中保存數年。

對于復融后的重組蛋白，比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20°C 或 -80°C，六個月內一般是沒有問題的。

（1）分裝有助于zui大程度減少反復凍融對抗體和重組蛋白活性的損害，并減少從同一管中多次吸取可能導致的污染。

（2）分裝的量最好按一次實驗用完為準，每份至少不能少于10 µl。體積越小，蛋白濃度受蒸發(fā)和管壁吸附影響的可能性越大。

（3）復融后的分裝重組蛋白如果一次用不完，將剩余母液保存在 4℃，避免再凍起來。

（4）蛋白工作液應當在當天配制并當天使用，最好不要在4℃超過1天。

2. 短期保存

對于短期保存，大多數蛋白質可以在4°C下保存，以避免反復凍融對活性的影響。然而，4°C保存面臨微生物污染的問題。因此，如果保存時間超過24小時，建議使用0.22微米的濾膜過濾樣品，然后在無菌管中保存。值得注意的是，并非所有蛋白質都適合在4°C下保存。

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