影響轉染效率的因素及注意事項有什么？

細胞轉染是指將外源遺傳物質（DNA或RNA）導入真核細胞的技術。 細胞轉染技術可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩定轉染。那么你知道影響轉染效率的因素及注意事項有什么嗎？讓我們一起來看看吧！

一、轉染試劑

不同細胞系轉染效率通常不同，因此在轉染實驗前需要根據細胞特性選擇合適的轉染試劑。可以通過已發表文獻和轉染試劑提供的已成功轉染的細胞株來進行選擇。

二、細胞狀態

轉染前細胞活力和總體健康狀況是轉染產生變異性的重要來源。一般建議在轉染前至少24小時進行傳代培養，以確保細胞在傳代后處于轉染的最佳生理條件，細胞活力大于 90%。最shi合轉染的細胞是復蘇經過幾次傳代后達到指數生長期的細胞，細胞生長旺盛，最容易轉染。為確保轉染的重復性，一般選擇低細胞代次（<30，能確保基因型不變）。如果發現同一株細胞轉染效率降低，可以嘗試重新復蘇細胞以恢復最佳結果。此外，污染會嚴重影響轉染結果。

匯合度：轉染時過高或者過低的細胞密度會導致轉染效率降低，乃至表達水平偏低。因此要根據具體的細胞類型、應用和轉染技術，來優化確定相應的最佳密度。如使用陽離子脂質體轉染時，貼壁細胞一般達到 70%-90% 的匯合度，懸浮細胞達到 5 ×10⁵ 至 2 ×10⁶ 個細胞/mL 的密度，即可獲得良好的結果。但不同的轉染試劑，針對不同細胞系要求轉染時的最適細胞密度各不相同，因此使用新的細胞系或者新的轉染試劑時，應進行實驗優化并建立一個穩定方法，包括適當的接種量和培養時間等等。不同實驗目的也會影響轉染時的鋪板密度，比如研究細胞周期相關基因等表達周期長的基因，就需要較低的鋪板密度，所以需要選擇能夠在較低鋪板密度下進行轉染的試劑。

三、培養基

不同的細胞或細胞類型都有非常特定的培養基、血清、補充劑要求，選擇最shi合細胞類型的培養基和轉染方法在轉染實驗中起著非常重要的作用。一些細胞系和原代細胞可能需要特殊的包被材料（如多聚賴氨酸、膠原蛋白、纖連蛋白等）以附著于培養板并獲得最佳的轉染結果。

可參考已發表文獻或細胞來源處獲得獲得針對特定細胞類型的合適培養基和轉染方法，如果沒有相關信息，則需要根據經驗或篩選實驗確定。

四、血清

一般培養基中存在血清可增強 DNA 轉染。但使用陽離子脂質體轉染時，一些血清蛋白會干擾復合物的形成，因此應在無血清條件下制備DNA-脂質體復合物。當使用 RNA 轉染細胞時，建議在無血清條件下轉染，以避免潛在的RNase污染。

五、抗生素

一般用于瞬時轉染的培養基中可含抗生素。不過，由于陽離子脂質體試劑可增加細胞通透性，因此也可能增加遞送到細胞內的抗生素量，從而導致細胞毒性以及較低的轉染效率。因此不建議在轉染培養基中加入抗生素。可在轉染前鋪板細胞時，使用無抗生素的培養基。

對于穩定轉染，不應在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，因為這些抗生素是 Gibco Geneticin 選擇性抗生素的競爭性抑制劑。在構建穩定的細胞系時，在轉染程序后預留 48-72 小時供細胞表達抗性基因，之后再加入選擇性抗生素。

六、轉染分子類型

質粒 DNA 是最chang用的轉染載體。質粒 DNA 的拓撲結構（線性或超螺旋）和大小會影響轉染的效率，超螺旋質粒 DNA 瞬時轉染的效率zui高。在穩定轉染中，相對于超螺旋 DNA，雖然使用線性 DNA 會導致細胞的 DNA 攝取量較低，但 DNA 整合到宿主基因組中的效果更優。雖然寡核苷酸、RNA、siRNA 和蛋白質等其他大分子也可以轉染到細胞中，但在使用這些大分子時，需要優化轉染條件。

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