夾心法與競爭法的ELISA檢測原理是什么？

ELISA的原理是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。那么你知道夾心法與競爭法的ELISA檢測原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！

一、夾心法原理

夾心法使用的是兩個抗體夾抗原或者兩個抗原夾抗體的方法，這種復(fù)合物被稱之為三明治夾心結(jié)構(gòu)，利用一對配對wan全的抗體，可以特異性檢測抗原，當(dāng)然主要針對的是具有至少2個以上抗原表位的抗原，抗體的配對可是門技術(shù)活，很多公司可以生產(chǎn)抗體，但是配對卻很少做，主要原因在于篩選的難度，可能開發(fā)的幾十株針對同一抗原的抗體，都很難有一對合適的可以配對，原因是多方面的，有抗原的表位、構(gòu)象等原因，也有抗體效價的原因，當(dāng)然還有篩選成本的原因，所以每一個ELISA試劑盒都是經(jīng)過多次和長期的驗(yàn)證得來的。

二、競爭法原理

競爭法的使用相對來說就窄一點(diǎn)了，其原理是利用抗原抗體結(jié)合的可逆性，但在合適濃度時又可達(dá)到結(jié)合和解離的穩(wěn)定期，那么親和力更強(qiáng)的抗體自然就能更有效的結(jié)合抗原了。一般結(jié)合的解離使用最多的就是SPR和BLI技術(shù)了，可以高精度或高通量的測抗原/抗體、受體/配體的親和力。

利用已知的抗原進(jìn)行標(biāo)記（抗原A），作為對照，實(shí)驗(yàn)組加入樣本（抗原B）及標(biāo)記抗原，與對照組相比，顯色低，則該抗原A與抗原B競爭結(jié)合抗體，這種方法一般用于抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原。

包被抗體進(jìn)行競爭法呢，一般用于ADA，競爭、非競爭抗體鑒定/篩選，抗體的競爭篩選是有效的免疫原性檢測手段之一。

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