蛋白質(zhì)定量有哪些方法？

蛋白定量是蛋白分離和分析前必須的一個(gè)重要步驟，蛋白色譜分離、蛋白質(zhì)電泳分析、蛋白質(zhì)免疫分離和分析、細(xì)胞裂解釋放的總蛋白定量、蛋白分子的標(biāo)記、蛋白結(jié)構(gòu)分析等，都需要可靠的定量分析作為基礎(chǔ)。蛋白定量分析應(yīng)用的領(lǐng)域包括生物科學(xué)，食品檢驗(yàn)，臨床檢驗(yàn)等等。蛋白質(zhì)定量有哪些方法？讓我們一起來看看吧！

一、比色法

蛋白定量常使用的方法是比色法，通常用于總蛋白的定量分析。根據(jù)蛋白和比色試劑的結(jié)合，可以將比色法分為：蛋白-染料結(jié)合法和蛋白-銅螯合化學(xué)試劑法。前者對(duì)應(yīng)的典型蛋白定量比色法是考馬斯亮藍(lán)G250染料結(jié)合法，后者則包括雙縮脲法，Lowry法，二喹啉甲酸（BCA）法。

1、Bradford法

Bradford法也稱作考馬斯亮藍(lán)法，是由Bradford于1976年建立的。該方法的原理是蛋白在酸性條件下和考馬斯染料結(jié)合，染料的最大吸收值發(fā)生改變，從465nm轉(zhuǎn)移為610nm，并且在595nm處有最大的吸收差異。結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上的染料數(shù)與蛋白所帶正電荷成正比，因此可以用該方法來對(duì)蛋白進(jìn)行定量。染料的顏色變化和蛋白中的堿性氨基酸（精氨酸、賴氨酸和組氨酸）有關(guān)，另外范德華力和疏水作用也會(huì)影響蛋白與染料的結(jié)合。

2、 BCA法

BCA (bicinchonininc acid) 1985年Paul K. Smith等人開發(fā)出BCA方法，該方法分為兩步：首先，在堿性條件下，蛋白將二價(jià)銅離子還原為一價(jià)銅離子，然后，BCA和一價(jià)銅離子結(jié)合，形成紫色化合物，該化合物在562nm時(shí)有最大吸收，且吸收值與蛋白濃度呈線性相關(guān)。

二、紫外法

紫外法也是常用的蛋白定量方法之一，該方法在簡(jiǎn)單的分光光度計(jì)中就可以定量測(cè)定溶液中蛋白質(zhì)的含量。蛋白質(zhì)對(duì)近紫外光的吸收依賴于酪氨酸（Tyr）和色氨酸（Trp）含量，同時(shí)在很小的程度上也會(huì)受到苯丙氨酸（Phe）和二硫鍵數(shù)量的影響。因此，蛋白質(zhì)之間A280的吸收值相差很大，對(duì)于濃度為1 mg/mL的溶液，從0到4的數(shù)值都有，大多蛋白的吸收值在0.5 - -1.5的范圍之間。

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